猫疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，专用于猫疱疹病毒I型（FHV-1）核酸的定性与定量检测。FHV-1是猫病毒性鼻气管炎（FVR）的主要病原体，本产品适用于科研场景，可检测眼鼻分泌物、血液、组织等样本中的病毒载量，具有高灵敏度和特异性。

技术原理

探针法设计：针对FHV-1保守基因序列设计特异性引物及探针，探针5'端标记FAM荧光基团，3'端含淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，释放荧光信号，通过实时监测Ct值判定病毒核酸浓度。

定量分析：通过标准曲线（10^1–10^6拷贝/μL）计算样本中病毒拷贝数。

试剂盒组成

| 组分 | 规格/数量 | 功能说明 |

| qPCR预混缓冲液 | 500 μL–1 mL | 含Hot Start Taq酶、dNTPs等 |

| 引物-探针混合液 | 50–100 μL | 特异性扩增FHV-1靶序列 |

| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线制备 |

| 模板稀释液 | 1 mL | 稀释样本或标准品 |

| 阴性对照 | 50 μL | 超纯水，用于排除污染 |

操作流程

标准曲线制备：

梯度稀释阳性对照（10倍稀释，6个浓度点），冰上保存备用。

样本处理：

使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本，建议设置阴性/阳性对照（N+2）。

PCR反应体系（20 μL）：

预混缓冲液10 μL + 酶混合液2 μL + 探针1 μL + 引物2 μL + 模板DNA 5 μL。

扩增程序：

50℃ 30 min（逆转录，若需）；94℃ 10 min预变性；40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本病毒拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct≤39，且有典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40或无扩增；

灰区（39<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

防污染措施：

分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），使用带滤芯枪头。

实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次），有效期12个月。

局限性：

样本质量、提取效率、基因突变可能导致假阴性；

交叉污染可能引发假阳性。

适用仪器与样本

仪器：ABI系列、Bio-Rad、安捷伦MX3000P等荧光定量PCR仪。

样本类型：眼鼻拭子、全血、脾脏、淋巴结等组织匀浆。

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