致泻性大肠埃希氏菌五重探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用五重探针法荧光定量PCR技术，专用于检测致泻性大肠埃希氏菌的特异性核酸序列，具有高灵敏度、强特异性和稳定性，适用于科研用途（不可用于临床诊断）。试剂盒包含标准曲线制备、RNA提取兼容性及荧光信号检测全流程所需组分。

规格与成分

| 成分名称 | 规格/包装量 | 功能说明 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶及DNA聚合酶 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 五重探针法qRT-PCR引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增目标基因 |

| 五重qRT-PCR探针 | 50 μL | 标记荧光基团，实时检测信号 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线建立及实验质控 |

储存条件

运输与保存：-20℃避光保存，有效期12个月；开封后避免反复冻融（≤6次）。

稳定性：低温运输（≤4天），开封后不影响有效期。

实验流程

标准曲线制备

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（2~7号），依次稀释并震荡混匀，冰上暂存。

RNA提取

建议设置N+2样本量（含阴/阳性对照），兼容柱式提取法或自选RNA纯化方法。

PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 待测RNA模板 | 5 | — | — |

| 标准稀释液 | — | — | 5（对应梯度） |

| 超纯水 | — | 5 | — |

扩增程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：阴性对照Ct≥40为有效实验；阳性样本Ct值低于阈值判定为阳性。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

阳性对照为无传染性DNA片段，不可替代活体样本。

适用仪器：ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche 480等荧光PCR仪。

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