蛇形隐孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

核心特点

高特异性：针对蛇形隐孢子虫保守基因（如18S rRNA）设计引物与探针，与其他隐孢子虫无交叉反应。

高灵敏度：最低检测限100–500拷贝/mL，适用于低载量样本。

即开即用：预混反应液含酶、dNTPs等，用户仅需提供DNA模板。

闭管操作：一管式反应降低污染风险，支持标准曲线定量分析。

试剂盒组成

| 组分 | 规格及包装 | 功能说明 |

| 2×qPCR预混液 | 500 μL（棕色管） | 含Taq酶、dNTPs、Mg²⁺等 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | 样本稀释及阴性对照配置 |

| 特异性引物混合液 | 100 μL（白盖） | 靶向扩增蛇形隐孢子虫基因 |

| TaqMan探针 | 50–100 μL（棕色管） | 5'端FAM标记，3'端淬灭基团 |

| 阳性对照（人工DNA片段） | 50 μL（1×10⁸拷贝/μL） | 实验有效性验证 |

| 使用手册 | 1份 | 操作流程及质控标准 |

操作流程

1. 样本处理

核酸提取：推荐柱式DNA提取试剂盒，或使用配套核酸释放剂（免提法）。

对照设置：每批次需包含阴性对照（无菌水）和阳性对照（标准品）。

2. 反应体系配置（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板DNA | 5 |

| 补水至 | 20 |

注：若仪器需ROX校正（如ABI 7500），需额外加入2μL 10×ROX。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 预变性 | 95℃ | 10分钟 |

| 循环扩增（40次） | 95℃ | 15秒 |

| | 60℃ | 60秒（采集荧光信号） |

数据分析

定量分析：以阳性对照梯度稀释（10²–10⁷拷贝/μL）绘制标准曲线，计算样本Ct值及拷贝数。

定性判定：

阳性：Ct≤30，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct≥36或无信号；

可疑：30<Ct<36，需复测确认。

注意事项

生物安全：操作需在BSL-2实验室进行，避免气溶胶污染。

分区操作：严格区分试剂准备区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯枪头。

质控要求：

阴性对照Ct≥40；

阳性对照Ct≤30且曲线正常。

运输与存储：低温运输，-20℃保存，避免反复冻融。

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