马源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

马源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法，通过特异性引物和荧光探针检测食品、饲料或生物样本中的马源性成分DNA，适用于：

食品真伪鉴别：针对加工后感官难以识别的马源性成分。

过敏原监测：避免马源性致敏物质混入其他食品。

科研应用：仅限实验室研究，不可用于临床诊断。

技术原理

采用实时荧光定量PCR技术：

探针设计：针对马源性基因保守序列设计引物及探针，5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。

定量分析：通过Ct值与标准曲线比对，实现模板的定性与定量检测。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（示例） | 功能说明 |

| 扩增反应液 | 975μL/管 | 含PCR缓冲液、dNTPs等 |

| 引物探针混合液 | 25μL/管 | 特异性引物及荧光探针 |

| 阳性质控品 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） | 验证实验有效性 |

| 阴性质控品 | 50μL | 排除污染或假阳性 |

| 荧光PCR稀释液 | 1mL | 标准曲线制备 |

操作步骤

1. 样本处理

DNA提取：推荐使用商品化核酸提取试剂盒，避免交叉污染。

保存要求：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月），运输需2-8℃冰袋。

2. 试剂配制

反应体系（20μL/反应）：

反应液19.5μL + 扩增液0.5μL + 模板DNA 5μL。

标准曲线制备：将阳性对照10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL）。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 1 min | （采集FAM通道信号） |

结果判读

阳性：Ct值≤30，且扩增曲线呈S型。

可疑：Ct值30-35，需重复检测。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

定量分析：通过标准曲线计算模板拷贝数（R²≥0.98）。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。

防污染措施：使用滤芯吸头，定期更换实验耗材。

质控要求：每批次实验需包含阴/阳性对照。

局限性：仅适用于DNA样本，RNA检测需额外反转录步骤。

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