猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

技术原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

靶标基因：猫科动物线粒体DNA高度保守区（如细胞色素b或12S rRNA基因）。

探针设计：5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针释放荧光信号，实时监测扩增产物量。

防污染设计：部分试剂盒含dUTP/UNG酶系统，降解残留产物避免假阳性。

试剂盒组成

| 组分 | 功能说明 |

| PCR预混液 | 含优化缓冲液、dNTPs等 |

| 热启动酶混合液 | 高特异性DNA聚合酶 |

| 引物探针混合液 | 猫源性成分特异性引物及FAM探针 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 定量标准品 |

| 阴性对照 | 无核酸酶水 |

| 荧光模板稀释液 | 用于标准曲线制备 |

操作步骤

1. 样本前处理

取1g样本匀浆后离心，提取RNA/DNA（推荐磁珠法或离心柱法）。

2. 标准曲线制备（定量检测需选做）

将阳性对照10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立标准曲线。

3. PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 用量 |

| 预混液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 引物探针混合液 | 2μL |

| 模板RNA/DNA | 5μL |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集（FAM通道） |

| 逆转录（可选） | 50℃ | 30 min | 否 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 否 |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec | 否 |

| | 60℃ | 30 sec | 是 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct值＞35或无Ct值。

质控要求：阴性对照无信号，阳性对照Ct值≤32。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免交叉污染。

使用带滤芯吸头，反应液避光保存。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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