绵羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

绵羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

技术原理

引物设计：针对绵羊源性成分高度保守基因区域设计特异性引物及探针，确保与其他物种无交叉反应。

荧光信号：探针法通过荧光标记探针水解释放信号，染料法则通过SYBR Green结合双链DNA释放荧光，实时监测扩增曲线。

定量/定性分析：通过Ct值与标准曲线对比，实现目标DNA的拷贝数定量或存在性判定。

试剂盒组成

核心组分：预混PCR反应液（含酶、dNTPs、缓冲液）、特异性引物对、探针（若为探针法）、阳性对照（无传染性DNA片段）、阴性对照（无核酸酶水）。

自备试剂：样本DNA模板、核酸提取试剂（推荐配套品牌提取试剂）。

操作步骤

样本处理：

核酸提取：使用商业化核酸提取试剂盒或自动化仪器提取样本DNA。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释（10^1~10^6拷贝/μL），用于标准曲线绘制。

反应体系配置（20μL体系）：

按比例混合模板DNA、引物、探针（或染料）、预混液。

PCR扩增：

程序设置：95℃预变性（5min）→ 40循环扩增（95℃ 10s，60℃ 30s，荧光采集）。

结果分析：

定量：根据标准曲线计算样本拷贝数。

定性：Ct值≤35且溶解曲线单一峰判为阳性。

性能参数

灵敏度：最低检测限100拷贝/反应。

特异性：与常见病原体无交叉反应。

线性范围：10^1~10^6拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

分区操作：核酸提取、反应配置、扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

保存条件：试剂-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3次）。

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