貉源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

貉源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶切割探针，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。

双重检测：部分含内参基因（如18S rRNA）引物探针，监控样本质量及扩增效率，避免假阴性。

产品组成

| 组分 | 规格/含量 | 功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 热启动DNA聚合酶 | 25-100μL | 催化扩增反应 |

| 貉特异性引物/探针 | 100μL（引物）、50μL（探针） | 靶向貉保守基因序列 |

| 阳性质控品 | 1×10^8拷贝/μL DNA片段 | 标准曲线制备及实验质控 |

| 阴性质控品 | 无靶标缓冲液 | 排除污染及非特异性扩增 |

| 模板稀释液 | 1 mL | 标准品梯度稀释 |

性能参数

灵敏度：≤10拷贝/μL貉DNA。

特异性：不与狐狸、犬科其他物种交叉反应。

线性范围：10^2~10^6拷贝/μL（定量检测）。

适用样本：动物组织、肉制品、饲料等（需提取RNA/DNA）。

操作步骤

1. 样本准备

提取样本RNA/DNA（建议浓度≥10 ng/μL）。

设置阴/阳性对照（N+2原则）。

2. 反应体系配置（20μL体系）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 貉特异性探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA/阳性对照 | 5 |

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增循环（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM信号） |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤38且扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值＞38或无扩增。

注意事项

分区操作：严格区分试剂配制区、样本处理区及扩增区。

质控要求：每批次需包含阴阳性对照。

安全提示：废弃反应管按生物危害废物处理。

应用限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪：ABI 7500、Bio-Rad CFX、LightCycler等。

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