牡蛎疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

检验原理

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和TaqMan探针检测牡蛎疱疹病毒（OsHV）的保守基因序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，在扩增过程中Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现实时定量分析。

灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。

特异性：引物及探针针对OsHV高度保守区设计，无交叉反应。

线性范围：定量检测时覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 系列（如7500、StepOnePlus）

安捷伦（MX3000P/3005P）

Roche LightCycler

Bio-Rad（CFX系列）

Eppendorf Mastercycler

试剂盒组分

qPCR预混液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq酶。

引物探针混合液：OsHV特异性引物及探针。

阳性对照：无传染性OsHV DNA片段（1×10^7–10^8拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

荧光PCR专用模板稀释液。

操作步骤

标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），每个梯度使用独立枪头操作，避免污染。

标记离心管（6–1号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上暂存。

样本处理

核酸提取：推荐配套水生动物DNA提取试剂盒，或使用兼容的商用试剂。

质控设置：

阳性对照（PC）：使用稀释后的阳性模板。

阴性对照（NC）：超纯水。

PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR预混液 | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| 模板DNA | 5 |

| 超纯水 | 补足至20 |

扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸/信号采集 | 60℃ | 1 min | |

结果分析

基线设定：选择指数扩增前的稳定信号段（通常6–15循环）。

阈值设定：高于阴性对照荧光峰值。

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

质控要求：

阴性对照：Ct≥40或无扩增。

阳性对照：Ct≤35且呈典型S型曲线。

注意事项

操作分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

标准品稀释需在独立区域完成。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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