水泡性口炎病毒印第安纳型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测水泡性口炎病毒印第安纳型（VSV-IND）的RNA。适用于科研领域，具有高灵敏性（检测限可达100拷贝/反应）和高特异性，引物设计针对病毒高度保守区，避免与其他病毒RNA交叉反应。

产品规格

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温泡沫箱加冰密封运输，阳性对照需单独存放以防污染。

主要成分

探针法qRT-PCR缓冲液

酶混合液（含逆转录酶和Taq DNA聚合酶）

荧光PCR专用模板稀释液

引物混合液（特异性靶向VSV-IND）

探针（5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL，无传染性DNA片段）

实验步骤

1. 标准曲线制备

使用阳性对照进行6个10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），稀释操作需在独立区域进行以避免污染。

2. RNA提取

建议设置阴性对照（NC，纯水）和阳性对照（PC，阳性对照稀释液）。

兼容多数病毒RNA提取试剂，或选用配套柱式提取试剂。

3. qRT-PCR反应

反应体系（20μL）：

缓冲液10μL、酶混合液2μL、探针1μL、引物混合液2μL、模板RNA 5μL。

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

PCR扩增：94℃ 15秒→60℃ 1分钟（采集FAM通道信号），共40循环。

数据分析

定量检测：以标准曲线（Ct值vs. log浓度）计算样本RNA浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤36；36<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、加样），避免交叉污染。

使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

反应液避光保存，避免气泡干扰。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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