水泡性口炎病毒新泽西型探针法荧光定量RT-PCR剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量RT-PCR技术，专用于水泡性口炎病毒新泽西型（VSV-NJ）RNA的定性或定量检测。通过特异性引物和探针设计，结合Taq酶的5'核酸外切酶活性，实现对靶序列的高灵敏度、高特异性扩增，适用于科研用途（不可用于临床诊断）。

产品组成

核心组分

探针法qRT-PCR缓冲液（500 μL）

酶混合液（含逆转录酶与Taq酶，100 μL）

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）

VSV-NJ引物混合液（100 μL）

VSV-NJ探针（50 μL，5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50 μL）

辅助材料

说明书1份

自备试剂：样本RNA提取试剂（如柱式病毒RNA提取试剂盒）。

技术参数

检测灵敏度：可达10^2拷贝/μL。

线性范围：10^2–10^7拷贝/μL（定量分析时覆盖5个数量级）。

特异性：针对VSV-NJ保守序列设计，无交叉反应。

规格：50次/盒（20 μL反应体系）。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

实验流程

1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）

标记6管（7号至2号），每管加45 μL稀释液。

7号管加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得10^7拷贝/μL标准品。

依次稀释至10^2拷贝/μL（每次换枪头）。

2. 样本RNA提取

建议设置N+2管（含阴性对照NC和阳性对照PC）。

使用兼容RNA提取试剂盒或免提取核酸释放剂。

3. qRT-PCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样本RNA/标准品/水 | 5 | 5（水） | 5（标准品） |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

PCR扩增（40循环）：

94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤36且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤36判为阳性；≥40为阴性；36–40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

安全防护：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

运输与存储：-20℃低温运输，避免反复冻融。

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