高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株（HP-PRRSV）的RNA。通过实时监测荧光信号，实现对病毒RNA的定性及定量分析，适用于科研用途（不可用于临床诊断）。

技术原理

反转录（RT）：将病毒RNA反转录为cDNA。

扩增（PCR）：通过特异性引物扩增目标cDNA片段。

检测（荧光定量）：探针与靶序列结合后释放荧光信号，随扩增循环数增加，荧光强度与起始模板量成正比。

产品特点

即开即用：用户仅需提供样本RNA模板。

高灵敏度：引物及探针针对病毒保守区设计，检测限达1×10²拷贝/μL。

高特异性：不与猪其他病原体RNA发生交叉反应。

内控对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL无传染性DNA片段），避免假阴性干扰。

适用范围：50次20μL体系反应，适用于组织、血液、粪便等样本。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 酶混合液（含逆转录酶、Taq酶） | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| HP-PRRSV引物混合液 | 100 μL |

| HP-PRRSV探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 1份 |

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输条件：低温干冰运输，避免反复冻融。

操作步骤

1. 样本制备

RNA提取：使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本RNA，避免DNA污染。

2. 标准曲线制备（可选）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以防污染。

3. PCR反应体系配制

按以下比例混合（单次反应）：

缓冲液：10 μL

酶混合液：0.5 μL

引物混合液：2 μL

探针：1 μL

模板RNA：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 反转录 | 50℃ | 15 min | 1 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ 10 sec → 60℃ 30 sec | 40 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

可疑：Ct值35~38，需复检。

阴性：Ct值≥38或无Ct值。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸清洁台面。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

免责声明

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或动物疫病防控。

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