水牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

水牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列特异性结合。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）与标准曲线比对，实现模板的绝对定量。

产品特点

高灵敏度：检测限低至10²拷贝/μL，适用于痕量水牛源性成分检测。

特异性强：引物/探针针对水牛保守序列设计，无交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），可区分假阴性。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |

| 水牛源性成分引物混合液 | 100μL | 特异性扩增 |

| 水牛源性成分探针 | 50μL | 荧光信号生成 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作流程

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样本，建议设置阴/阳性对照。

3. qRT-PCR反应

反应体系（20μL）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、PCR扩增需在独立区域进行。

避免反复冻融：试剂解冻后需混匀并短暂离心，剩余组分立即放回-20℃。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，确保结果可靠性。

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