熊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

熊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

用于检测鲍鱼等样本中熊源性成分的DNA，适用于科研实验，不可用于临床诊断。

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测样本DNA/RNA即可进行检测。

高特异性：引物及探针基于熊源性成分保守序列设计，无交叉反应。

高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶标DNA。

操作简便：一管式荧光定量PCR，减少污染风险。

对照齐全：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，便于结果判读。

试剂盒组成

上研生版本：

荧光PCR缓冲液、酶混合液、模板稀释液

引物混合液、探针、阳性对照

生物版本：

探针法qRT-PCR缓冲液、酶混合液、引物探针混合液

阳性对照（无传染性DNA片段）

使用方法

1. 标准曲线制备（以10^2~10^7拷贝/μL为例）

稀释步骤：

标记7管（1~7号），1号管加90μL稀释液，其余加45μL。

从阳性对照（10^8拷贝/μL）取10μL加入1号管，依次10倍稀释至6号管，7号管为阴性对照。

注意事项：

使用独立操作区及带滤芯吸头，避免交叉污染。

稀释后分装保存于-20℃，避免反复冻融。

2. 样本DNA/RNA制备

推荐使用配套裂解液或兼容的核酸提取试剂盒，确保纯度满足PCR要求。

3. PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针/引物混合液 | 1-2μL | 1-2μL | 1-2μL |

| 模板 | 5μL | - | - |

| 标准曲线稀释液 | - | - | 5μL |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

4. 反应程序

逆转录（若适用）：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

结果分析

标准曲线：以阳性对照拷贝数对数与Ct值绘制，要求R²≥0.98。

判读标准：

阳性：Ct值<30；

可疑：30≤Ct≤35，需复测；

阴性：Ct值≥35或无信号。

注意事项

操作环境：需在洁净区域进行，使用滤芯吸头。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

应用限制：仅限科研使用，不可用于临床或诊断目的。

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