小反刍兽疫病毒疫苗株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品基本信息

检测方法：TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR

适用目标：小反刍兽疫病毒（PPRV）通用型及疫苗株RNA

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次），有效期12个月。

试剂盒组成

反应液：含特异性引物及探针（FAM通道检测）。

酶液：逆转录酶与Taq DNA聚合酶混合液。

阳性质控品：PPRV疫苗株RNA阳性对照。

阴性质控品：无核酸酶水阴性对照。

注：不同规格（25T/50T）组分体积差异，具体以包装标注为准。

样本要求

适用样本类型：

动物组织（脾脏、扁桃体、淋巴结等病变与健康交界处）；

全血、分泌物。

样本处理：

推荐使用磁珠法或离心柱法提取RNA，避免DNA污染。

提取后RNA应保存于-80℃，避免降解。

操作步骤

RNA提取：

使用TRIZOL法或商用提取试剂盒，注意避免RNA酶污染。

紫外分光光度法检测RNA纯度（A260/A280比值1.8-2.1）。

RT-PCR反应体系配制：

每反应管加入19μL反应液 + 1μL酶液 + 5μL模板RNA（总体系25μL）。

扩增程序设置：

逆转录：50℃ 30分钟（可选）；

预变性：95℃ 2分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（收集荧光），共45循环。

结果判读

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长。

可疑：40<Ct≤45，需重复检测确认。

阴性：无Ct值或扩增曲线平直。

质控要求：

阴性质控品无扩增；

阳性质控品Ct值≤32。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用一次性耗材，实验后工作台需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

若样本出现降解或抑制剂干扰（如A260/A280异常），需重新提取。

试剂解冻后需混匀离心，避免气泡影响扩增效率。

局限性声明

检测结果需结合临床症状及其他实验室检测综合判断。

病毒变异可能导致假阴性，建议定期验证引物探针匹配性。

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