甲型流感（禽流感）病毒N8亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

技术参数

适用亚型：N8亚型（部分产品可能兼容H5N8亚型检测，需核对引物特异性）。

检测方法：实时荧光定量RT-PCR（探针法），支持定性和定量分析。

适用范围：科研用途（非临床诊断），适用于咽喉拭子、泄殖腔拭子等样本。

试剂盒组成

RT-PCR反应液：含缓冲液、dNTPs等，需避光保存。

酶混合液：逆转录酶与Taq DNA聚合酶预混物。

引物-探针干粉：针对N8亚型基因特异性设计（FAM通道检测）。

阳性对照：无传染性DNA片段（如10^7拷贝/μL）。

阴性对照：无RNA/DNA模板的稀释液。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

样本要求

样本类型：

咽喉拭子：深入喉头刮取3-5次，置于1 mL生理盐水中。

泄殖腔拭子：类似方法采集。

保存条件：

短期：2-8℃冷藏（≤24小时）；

长期：-80℃冻存（避免反复冻融）。

操作步骤

1. 试剂准备

试剂完全融化后混匀，瞬时离心。按反应数（n=样本数+阴阳性对照+误差预留）配制混合液（每反应：RT-PCR反应液17.5 μL + 酶液2.5 μL）。

2. RNA提取

推荐使用QIAGEN或Roche RNA提取试剂盒，按说明书操作。

3. 加样与扩增

每反应管加入5 μL模板RNA（终体积25 μL）。

扩增程序：

反转录：50℃ 10分钟；

预变性：95℃ 3分钟；

PCR扩增：95℃ 5秒 → 55℃ 40秒（采集FAM信号），共40循环。

4. 标准曲线制备（定量分析）

阳性对照10倍梯度稀释（10^1-10^6拷贝/μL），用于绘制标准曲线。

结果判读

有效性判定：

阳性对照：Ct≤35，S型扩增曲线；

阴性对照：Ct＞38或无扩增。

样本判定：

阳性：Ct≤35或明显指数增长；

可疑：35＜Ct≤38，需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

运输与保存：

试剂盒：-20℃避光保存，有效期12个月；

样本：运输需2-8℃冰袋，长期保存于-80℃（≤6个月）。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

提取效率或操作误差可能影响结果准确性。

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