人类白细胞抗原A（HLA-A）基因探针法荧光定量PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测人类白细胞抗原A（HLA-A）基因的核酸序列，适用于科研领域中对HLA-A基因的定性或定量分析，如基因分型、表达水平研究等。不可用于临床诊断或治疗。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对HLA-A基因高度保守区设计，避免与其他生物样本交叉反应。

即开即用：用户仅需提供DNA模板，试剂盒包含预混反应液、阳性质控品（人工合成DNA片段）及阴性质控品。

宽动态范围：定量检测线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

兼容性：适配主流荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad、LightCycler等）。

稳定性：-20℃避光保存，有效期12个月，反复冻融次数少于7次。

试剂组成

| 组分名称 | 规格 |

| HLA-A扩增液 | 25μL × 1管 |

| HLA-A反应液 | 975μL × 1管 |

| 阳性质控品 | 50μL × 1管（1×10⁸拷贝/μL） |

| 阴性质控品 | 50μL × 1管 |

| 说明书 | 1份 |

注意：不同批号组分不可混用。

操作步骤

1. 样本制备

使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，浓度建议≥10 ng/μL。

2. 标准曲线制备（定量检测需执行）

标记6管离心管（7~2号），每管加45 μL无核酸酶水。

梯度稀释阳性质控品：

7号管加入5 μL原液（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀得1×10⁷拷贝/μL标准品。

依次稀释至2号管（1×10³拷贝/μL），每步更换枪头。

3. PCR反应体系（20μL/反应）

反应液：17 μL HLA-A反应液 + 3 μL DNA模板（或标准品/阴性质控品）。

程序设置：

95℃ 预变性 2分钟 → 95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（40循环，荧光采集）。

结果判读

定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

定量：根据标准曲线计算样本拷贝数。

注意事项

实验分区操作（样本制备区、扩增区），避免污染。

阳性质控品需独立区域稀释，防止污染其他组分。

仅限科研用途，操作人员需具备分子生物学实验经验。

储存与运输

温度：-20℃±5℃，避光保存。

运输：干冰或冰袋低温运输。

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