百合探针法PCR鉴定试剂盒 新品

性能参数

灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列。

特异性：针对百合保守序列设计引物及探针，无交叉反应。

检测方法：探针法（TaqMan探针），5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 功能描述 |

| qPCR缓冲液 | 含Mg²⁺、dNTPs等反应组分 |

| 热启动Taq酶混合液 | 高扩增效率，减少非特异性产物 |

| 探针及引物混合液 | 预混优化浓度 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 无传染性DNA片段，用于标准曲线建立 |

| 模板稀释液 | 用于阳性对照梯度稀释 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样本DNA提取

推荐兼容柱式提取法，需设置阴性/阳性提取对照（N+2原则）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 5 |

4. 反应程序

逆转录（若需）：50℃ 30 min（仅适用于RNA模板）。

预变性：94℃ 10 min。

扩增循环（40 cycles）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）。

质控标准

阳性对照：Ct值≤32，扩增曲线呈指数期。

阴性对照：无扩增曲线或Ct值≥40。

无效实验判定：阳性质控未达标或阴性质控出现扩增。

注意事项

防污染：分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），使用带滤芯枪头。

试剂稳定性：避免反复冻融，分装保存。

模板质量：推荐A260/A280比值1.8~2.0，避免抑制剂残留。

探针避光：操作时需避光以减少荧光淬灭。

常见问题解决

无扩增信号：检查试剂活性、模板完整性或抑制物干扰。

非特异性峰：优化退火温度或重新设计引物/探针。

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