猪呼肠孤病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪呼肠孤病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法，用于定性检测猪血清、粪便、肠道组织或细胞培养物中的猪呼肠孤病毒（PRV）核酸。适用于：

猪群病毒感染的早期诊断与监测

引种检疫及流行病学调查

疫苗免疫效果评估（需配合中和抗体检测）

检测原理

RNA提取：样本中病毒RNA经裂解、纯化获得。

逆转录（RT）：使用高效逆转录酶将病毒RNA转化为cDNA。

荧光定量PCR：

特异性引物：靶向PRV保守基因区域（如S1基因）。

TaqMan探针：5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团，水解后释放荧光信号。

通过实时监测荧光强度，定量分析病毒载量（Ct值）。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（50T） | 保存条件 |

| PRV qRT-PCR反应液 | 1.2 mL | -20℃避光 |

| 逆转录酶混合液 | 100 μL | -20℃ |

| PRV阳性对照 | 100 μL | -20℃（单独存放） |

| PRV阴性对照（无核酸水）| 1 mL | -20℃ |

| RNase-Free ddH₂O | 1 mL | 室温/4℃ |

自备材料

RNA提取试剂盒（如柱式法）

无核酸酶离心管、吸头

荧光定量PCR仪（支持FAM通道）

离心机、涡旋振荡器、冰盒

检测流程

1. 样本处理

组织/粪便：取100 mg加入1 mL PBS匀浆，离心取上清。

血清/细胞培养物：直接取200 μL使用。

2. RNA提取

按商业RNA提取试剂盒说明书操作，最终用30 μL RNase-Free水洗脱。

3. RT-PCR反应体系配制

| 组分 | 体积（μL） |

| PRV qRT-PCR反应液 | 15 |

| 逆转录酶混合液 | 2 |

| 模板RNA | 5 |

| RNase-Free ddH₂O | 补足至25 |

总反应体积：25 μL

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 30 sec | | |

注：使用FAM通道采集荧光信号。

结果判读

阴性对照：Ct值 ≥ 38 或无扩增曲线。

阳性对照：Ct值 ≤ 30，呈典型S型曲线。

样本判定：

阳性：Ct值 ≤ 35，且曲线呈指数增长。

可疑：35 < Ct值 < 38，建议重复检测。

阴性：Ct值 ≥ 38 或无扩增。

性能参数

灵敏度：最低检测限 10 拷贝/μL

特异性：不与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、传染性胃肠炎病毒（TGEV）、轮状病毒（PoRV）等发生交叉反应。

重复性：批内/批间变异系数（CV）≤ 5%。

注意事项

阳性对照含灭活病毒核酸，需在独立区域操作。

所有试剂使用前需完全解冻并混匀，避免反复冻融。

临床样本应新鲜采集或-80℃保存，避免反复冻融。

本试剂盒仅用于科研，临床诊断需结合临床症状及其他检测方法。

储存与运输

储存：-20℃避光保存（有效期12个月）。

运输：干冰或冰袋低温运输。

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