柏子仁探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于柏子仁（Semen platycladi）的特异性鉴定。通过靶向柏子仁保守基因序列（如ITS区或叶绿体基因），结合TaqMan探针实时检测荧光信号，实现高灵敏、高特异的定性或定量分析。适用于药材真伪鉴别、质量控制等科研用途，不可用于临床诊断。

产品特点

高特异性：引物及探针针对柏子仁独有序列设计，与侧柏叶、松子等常见混淆物种无交叉反应。

灵敏度优异：最低检测限达10²拷贝/μL，可检测低浓度样本。

即开即用：预混液含Taq酶、dNTPs、缓冲液、引物及探针，用户仅需提供DNA模板。

内置对照：提供阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）及阴性对照，便于结果判读和质控。

防污染设计：采用分区操作流程，降低假阳性风险。

规格与成分

| 成分 | 规格/包装量 | 保存条件 |

| 2×Probe qPCR预混液 | 500 μL | -20℃避光 |

| 柏子仁引物混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 柏子仁探针 | 50 μL | -20℃避光（棕色管）|

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | -20℃单独存放 |

| 荧光PCR专用稀释液 | 1 mL | -20℃ |

| 使用手册 | 1份 | 常温 |

操作步骤

标准曲线制备（定量分析需6个梯度稀释，10²–10⁷拷贝/μL）。

DNA提取：自备样本DNA，建议OD₂₆₀/₂₈₀=1.8–2.0，避免抑制物污染。

PCR反应体系（20 μL/反应）：

预混液10 μL + 引物2 μL + 探针1 μL + DNA模板7 μL。

PCR程序：

预变性：95℃ 3分钟；

40循环：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）。

结果分析

定量分析：以标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct≤35且扩增曲线呈S型；

阴性：Ct≥40或无扩增；

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

严格分区操作：试剂准备、样本处理、扩增需独立区域，避免交叉污染。

保存与稳定性：-20℃保存，避免反复冻融（≤3次），有效期12个月。

质控要求：阳性对照Ct≤30，阴性对照无扩增，否则实验无效。

局限性

假阳性风险：需防范扩增产物污染。

假阴性可能：样本中存在PCR抑制物或DNA降解。

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