萹蓄探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测萹蓄特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。荧光强度与扩增产物量成正比，实现定量分析。

产品特点

高灵敏度：优化的引物和探针可检测低拷贝数模板。

高特异性：针对萹蓄保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混反应体系，仅需提供样品RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），区分假阴性结果。

适用性：兼容多数RNA提取方法，推荐配套柱式提取试剂盒。

组分清单

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 萹蓄探针法引物混合液 | 100 μL |

| 萹蓄qRT-PCR探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7拷贝/μL），冰上操作避免污染。

2. RNA提取

建议设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样品RNA | 5 μL | — | — |

| 超纯水 | — | 5 μL | — |

| 标准稀释液 | — | — | 5 μL |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样品浓度。

定性检测：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30；样品Ct≤35判为阳性，≥40为阴性，35–40需复测。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作分区进行，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需混匀，避免反复冻融。

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