槟榔探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光信号的增长（Ct值），实现对靶标核酸的定性和定量检测。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对槟榔（Semen arecae）保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：用户仅需提供样品RNA/DNA模板（不同品牌要求可能不同）。

内置对照：提供阳性对照（无传染性DNA片段，1×10^8拷贝/μL），便于区分假阴性。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | 槟榔探针法qPCR引物混合液 | 100μL |

| 试剂五 | 槟榔qPCR探针（荧光标记） | 50μL |

| 试剂六 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（以10^2~10^7拷贝/μL梯度为例）：

用阳性对照按10倍梯度稀释，分装至标记管（7~2号），冰上保存备用。

2. 样品制备：

提取待测样本RNA/DNA，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR反应体系（20μL）：

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qPCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 样本模板 | 5μL | — | — |

| 标准品 | — | — | 5μL |

| 超纯水 | — | 5μL | — |

4. 反应程序：

逆转录（如适用）：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

PCR循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35（或39），且有典型扩增曲线。

阴性：Ct≥40。

灰区（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

局限性：

样本质量、提取方法、病原体变异可能影响结果。

试剂保存不当或操作误差可能导致假阴性/假阳性。

废弃物处理：实验后需用10%次氯酸或75%酒精消毒台面及器材。

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