苍术探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测苍术特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现靶序列的定量与定性分析。

产品组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |

| 荧光PCR专用稀释液 | 1 mL | 标准品及样品稀释 |

| 引物混合液 | 100μL | 苍术特异性引物 |

| 荧光探针 | 50μL | 靶序列特异性探针 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线建立与质量控制 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南与注意事项 |

实验步骤

1. 标准曲线制备

取6支离心管，标记为2-7号，每管加入45μL稀释液。

7号管加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀得1×10⁷拷贝/μL标准品，依次梯度稀释至1×10²拷贝/μL。

2. 样品RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒制备待测样本RNA，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板/标准品/水 | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环）| 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性分析：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

阳性：Ct≤35且曲线呈典型S型。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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