草乌探针法PCR鉴定试剂盒

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

运输条件：低温冰袋运输，避免高温或强光暴露。

产品组成

探针法qPCR缓冲液（500μL）

qPCR酶混合液（50μL，含热启动DNA聚合酶）

荧光PCR模板稀释液（1mL）

引物-探针干粉（50T，针对草乌特异性基因序列）

阳性对照（50μL，10^7拷贝/μL，无传染性DNA片段）

阴性对照（无核酸水）

实验步骤

（一）标准曲线制备（定量分析需6个稀释梯度）

标记离心管（6管，对应10^1–10^6拷贝/μL梯度）。

每管加入45μL稀释液，依次梯度稀释阳性对照（5μL转移），涡旋混匀后冰浴备用。

（二）样本DNA提取

推荐使用柱式DNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本量）。

（三）qPCR反应体系（20μL/管）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 1 |

| 引物-探针混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 无核酸水 | 补至20 |

（四）PCR程序（需优化仪器参数）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 60 sec | 40 |

| 信号采集 | FAM通道 | 每循环采集 | - |

数据分析

定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤36（需复测36<Ct<40的样本）。

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需分区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

提取效率差异或运输不当可能影响结果准确性。

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