转基因元件探针法荧光定量PCR试剂盒

转基因元件探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用实时荧光定量PCR技术（TaqMan探针法），针对转基因玉米品系NK603的品系特异性边界序列设计引物与探针，通过检测外源基因插入位点的独特核酸序列实现高特异性鉴定。适用于食品、饲料等样本中NK603成分的定性检测，检出限为0.1%。

检测原理

靶标序列：检测外源DNA与玉米基因组连接处的特异性边界序列（非启动子或通用基因），确保仅NK603品系呈阳性。

探针设计：

FAM标记探针：结合NK603特异性序列。

内标探针（如VIC/HEX标记）：检测玉米内源基因（如Zein），验证DNA提取质量及PCR有效性，避免假阴性。

多重PCR：单反应管同步检测目标序列与内标，提升效率。

试剂盒组成

PCR反应液（含dNTPs、缓冲液等）

热启动Taq酶

NK603特异性引物探针混合液

阳性对照（含NK603靶序列的DNA）

阴性对照（非转基因玉米DNA）

内标系统试剂

技术参数

检测范围：2×10³～1×10⁸ copies/mL

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

适用仪器：ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P等主流荧光PCR仪。

操作流程

样本制备：按《GB/T 19495.3-2004》提取样本DNA，避免交叉污染。

PCR体系配制：

反应液 + 酶 + 引物探针组 + 模板DNA（5μL）。

扩增程序：

预变性：95℃ 10分钟

45循环：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（荧光采集）

结果判读：

阳性：FAM通道Ct≤40，呈S型曲线。

阴性：无扩增曲线或Ct≥45。

可疑值（40<Ct<45）：需重复检测确认。

注意事项

分区操作：严格分离样本制备区、模板添加区、扩增区，防止气溶胶污染。

质量控制：

内标通道必须有效（VIC阳性），否则实验无效。

阳性对照需呈S型曲线，阴性对照无扩增。

耗材要求：使用灭菌吸头、离心管，避免RNA酶污染。

应用范围

科研用途：转基因作物鉴定、食品安全监测。

不适用于：临床诊断或医疗用途。

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