鸭坦布苏病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

鸭坦布苏病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本产品专用于检测鸭坦布苏病毒核酸，适用于科研用途，可进行定性和定量分析。

产品特点

即开即用设计，用户只需提供RNA模板

优化的引物和探针确保高灵敏度和特异性

包含阳性和阴性对照，便于结果判读

线性范围达5个数量级，适合定量分析

与多种荧光定量PCR仪兼容

检验原理

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光RT-PCR技术，针对鸭坦布苏病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针。在反应体系中存在病毒RNA模板时，PCR扩增过程中探针被切割释放荧光信号，通过实时监测荧光强度变化实现核酸的定性和定量检测。

试剂组成

鸭坦布苏病毒扩增液：25μL×1管

鸭坦布苏病毒反应液：975μL×1管

阳性对照：50μL×1管（1×10⁶拷贝/μL）

阴性对照：50μL×1管

说明书：1份

注意：不同批号组分不可混用，试剂盒内各组分足够完成标示次数的检测。

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议冻融次数不超过7次），有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

Roche LightCycler系列

Bio-Rad CFX系列

其他具有FAM检测通道的实时荧光定量PCR仪

自备材料

无RNase的1.5mL离心管

0.2mL PCR反应管

滤芯吸头（10μL, 200μL, 1000μL）

离心机

振荡混合器

各种规格移液器

RNA提取试剂盒（推荐柱式病毒RNA提取试剂盒）

样本要求

样本类型

组织样本：脑、脾脏、肝脏等

血清/血浆

泄殖腔拭子

病毒培养物

样本处理

新鲜组织样本应尽快处理，或保存于-20℃（短期）/-70℃（长期）

血清/血浆可直接用于RNA提取

拭子样本需用适量PBS或生理盐水洗脱

样本保存与运输

短期保存：-20℃

长期保存：-70℃（不超过6个月）

运输条件：2-8℃冰袋运输，避免反复冻融

使用方法

RNA提取

使用商品化病毒RNA提取试剂盒按说明书操作

提取的RNA应立即使用或保存于-70℃

试剂准备

从-20℃取出试剂盒，平衡至室温（20-25℃）

振荡混匀后低速离心10秒

按以下比例配制反应混合液（以N次检测为例）：

鸭坦布苏病毒反应液：19.5μL × (N+2)

鸭坦布苏病毒扩增液：0.5μL × (N+2)

充分混匀后分装至PCR管，每管20μL

加样

分别加入5μL待测样本RNA、阳性对照和阴性对照

盖紧管盖，短暂离心

PCR扩增

推荐反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：95℃ 10分钟

扩增循环（45个循环）：

95℃ 15秒

60℃ 1分钟（采集荧光信号）

结果分析

定量分析

以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线

根据样品Ct值计算病毒RNA浓度

定性分析

阳性：Ct值≤36且有典型扩增曲线

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线

可疑（36<Ct<40）：需重复检测

注意事项

实验分区操作：样本处理、试剂配制、扩增检测应在不同区域进行

使用无RNase耗材，避免RNA降解

反应液避光保存，避免反复冻融

实验废弃物需经消毒处理（10%次氯酸或75%乙醇）

本产品仅用于科研，不适用于临床诊断

质量控制

阴性对照：Ct值≥40或无扩增

阳性对照：Ct值≤36且有典型扩增曲线

无效实验：阳性对照无扩增或阴性对照出现扩增

技术参数

检测限：≤100拷贝/反应

线性范围：10¹-10⁶拷贝/μL

特异性：不与禽类其他常见病毒发生交叉反应

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