腰果源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

腰果源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本产品为基于探针法的荧光定量PCR试剂盒，专用于检测腰果源性成分。试剂盒采用优化的引物和探针设计，具有高灵敏度和特异性，适用于科研领域的腰果源性成分检测。

产品规格

规格：50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应

适用样本类型：需用户自备样品RNA

用途限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | 腰果源性成分探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |

| 试剂五 | 腰果源性成分qRT-PCR探针 | 50μL |

| 试剂六 | 腰果源性成分探针法qRT-PCR阳性对照(1×10⁸拷贝/μL) | 50μL |

| - | 产品说明书 | 1份 |

储存条件

运输条件：低温运输

保存条件：-20℃避光保存

有效期：12个月（避免反复冻融）

实验前准备

自备试剂：样品RNA

实验设备：荧光定量PCR仪、离心机、冰盒、移液器及带芯枪头等

实验分区：建议在独立区域进行样品制备、试剂配制和PCR扩增

实验步骤

标准曲线样品制备

标记6个离心管，编号为7至2

每管加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液

7号管加入5μL阳性对照(1×10⁸拷贝/μL)，震荡混匀，得到1×10⁷拷贝/μL标准品

依次进行10倍系列稀释，获得6个浓度梯度(10²-10⁷拷贝/μL)的标准曲线样品

样品RNA制备

建议设置N+2个提取(N个样品+1个阳性对照+1个阴性对照)

阳性对照(PC)：使用阳性对照的10000倍稀释液

阴性对照(NC)：使用超纯水

使用兼容的RNA提取方法纯化样品RNA

探针法qRT-PCR反应

反应体系(20μL)：

探针法qRT-PCR缓冲液：10μL

探针法qRT-PCR酶混合液：2μL

腰果源性成分qRT-PCR探针：1μL

腰果源性成分探针法qRT-PCR引物混合液：2μL

样品RNA模板或标准品：5μL

PCR反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

PCR循环(40个循环)：

94℃ 15秒

60℃ 1分钟(采集FAM通道荧光信号)

数据分析

定量分析

以阳性对照浓度的对数值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线

根据待测样品的Ct值推算RNA浓度

定性分析

阴性对照：Ct值≥40

阳性对照：Ct值≤36且有典型扩增曲线

待测样品判定：

Ct≤36：阳性

Ct≥40：阴性

36<Ct<40：需重复实验确认

注意事项

所有操作需严格按照说明书进行

试剂使用前应完全融化并混匀

避免气泡存在，确保管盖紧闭

使用一次性耗材，防止交叉污染

不同实验步骤应在独立区域完成

实验结束后对工作台进行消毒处理

阳性对照需单独存放，避免污染其他组分

技术参数

分析灵敏度：高(可检测低至10²拷贝/μL)

线性范围：至少5个数量级

特异性：针对腰果源性成分高度特异，无交叉反应

质量控制

阳性对照：确保试剂盒性能正常

阴性对照：监控实验污染情况

标准曲线：评估反应效率(理想斜率应为-3.3±0.3)

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