小麦源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

小麦源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测小麦源性成分，具有高灵敏度和特异性。适用于食品、饲料等样品中小麦源性成分的定性和定量分析，仅限科研用途。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 小麦源性成分引物混合液 | 100 μL |

| 小麦源性成分探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 1份 |

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

实验原理

探针法原理：

探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放报告基团荧光信号，通过实时检测荧光强度定量目标DNA。

定量分析：

标准曲线法：以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，计算待测样本拷贝数。

操作步骤

标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管（7至2号），每管加45 μL稀释液。

7号管加入5 μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL标准品。

依次稀释至1×10²拷贝/μL，冰上保存。

样本RNA提取

建议设置阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。

使用兼容的RNA提取试剂盒或柱式法纯化样本RNA。

PCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：根据标准曲线计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤36且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤36为阳性；≥40为阴性；36-40需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、PCR扩增），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，反应液避光保存。

阳性对照单独存放，严禁污染其他组分。

实验后消毒台面（10%次氯酸或75%乙醇）。

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