羽扇豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

羽扇豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

定性或定量检测样本中羽扇豆源性成分的DNA，适用于食品、饲料或生物样本的溯源分析。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；阳性对照需单独存放。

技术原理

探针法：

针对羽扇豆保守基因序列设计特异性引物及荧光标记探针，通过qPCR仪实时监测探针水解释放的荧光信号，实现高特异性定量检测。

SYBR Green染料法：

染料与双链DNA结合后释放荧光，通过Ct值分析目标基因拷贝数，需配合熔解曲线验证特异性。

操作流程

样本处理：

新鲜组织避免反复冻融（冻融≤3次），-70℃长期保存。

核酸提取推荐使用配套试剂盒或自动化提取仪。

反应体系配置：

按比例混合预混液（含酶、dNTPs）、引物/探针、模板DNA及对照（阳性对照需梯度稀释）。

扩增程序：

预变性（95℃, 5min）→ 循环扩增（95℃ 15s, 60℃ 30s, 40-45次）→ 荧光信号采集。

结果判读

定量分析：以阳性对照拷贝数为标准曲线基准，根据Ct值计算样本中目标DNA浓度。

定性阈值：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性；无扩增曲线或Ct值>35为阴性。

注意事项

防污染：

分设试剂配制区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯吸头。

实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

试剂处理：

预混液需完全解冻后离心混匀，避免反复冻融。

探针法试剂需避光保存。

质控要求：

每批次实验需包含阴性对照（无模板）及阳性对照（已知浓度）。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

样本中PCR抑制物（如多糖、酚类）可能影响检测灵敏度，建议稀释或纯化后复测。

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