河豚鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

河豚鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

基于探针法荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

实时定量：通过监测扩增过程中荧光信号的增长（Ct值），实现对河豚鱼源性成分的定性和定量分析。

高特异性：引物及探针针对河豚鱼源性成分高度保守区设计，避免与其他物种交叉反应。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶） |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 引物混合液 | 100μL（特异性引物） |

| 探针 | 50μL（FAM标记） |

| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（6管），依次稀释阳性对照至10⁶–10¹拷贝/μL，冰上保存备用。

2. 样本处理

RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。

模板制备：纯化后的RNA需用稀释液调整至适宜浓度。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（荧光采集） |

数据分析

定量检测：以标准曲线（log拷贝数 vs. Ct值）计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct值≤36，典型扩增曲线；

阴性：Ct值≥40；

可疑值（36<Ct<40）需复测确认。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

仪器兼容性：适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

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