金枪鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

金枪鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术（TaqMan探针），专用于检测金枪鱼源性成分，具有高特异性、高灵敏度及稳定性。适用于食品、饲料等样本中金枪鱼源性成分的定性及定量分析，仅限科研用途。

技术原理

探针法原理：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

实时定量：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现模板的定量分析。

产品组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 引物混合液 | 100 μL | 金枪鱼特异性引物（保守区设计）|

| TaqMan探针 | 50 μL | 金枪鱼特异性探针（FAM标记） |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线建立及质控 |

| 说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析指南 |

储存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温干冰运输。

实验步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

2. 样本RNA提取

推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，同时设置阴/阳性对照（PC/NC）。

3. qRT-PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样本RNA/标准品 | 5 | - | 5（对应梯度） |

| 超纯水 | - | 5 | - |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环）| 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量分析：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤39。样本Ct≤39判为阳性。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质控要求：每批实验需包含阴/阳性对照。

局限性：

基因突变或提取效率差异可能导致假阴性；

污染或试剂保存不当可致假阳性/定量偏差。

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