侧柏叶探针法PCR鉴定试剂盒

产品特点

即开即用：用户仅需提供DNA模板，试剂盒预混优化组分（含缓冲液、酶、引物及探针）。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对侧柏叶保守序列设计，无交叉反应，检测限低至10拷贝/μL。

双重应用：支持定性与定量检测，定量线性范围达5个数量级（10^1-10^6拷贝/μL）。

质控完善：含阳性对照（10^7拷贝/μL无传染性DNA片段）及阴性对照，有效区分假阴性。

操作便捷：含上样染料，PCR产物可直接电泳；探针法采用FAM通道荧光信号采集。

试剂盒组分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL |

| 试剂六 | 使用手册 | 1份 |

操作流程

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管（6-1号），每管加45μL稀释液。

6号管加入5μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡混匀得10^6拷贝/μL标准品，依次稀释至10^1拷贝/μL。

2. 样品DNA提取

建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），兼容常规DNA提取试剂盒。

3. qPCR反应体系（20μL/管）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qPCR缓冲液（试剂一） | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液（试剂二） | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针（试剂四） | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液（试剂四） | 2μL | 2μL | 2μL |

| DNA模板 | 5μL | - | - |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

| 标准品 | - | - | 5μL |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min（若含RNA步骤）；

预变性：94℃ 10 min；

扩增：40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤39，扩增曲线典型；

阴性：Ct≥40或无信号；

可疑：39<Ct<40，需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需独立区域，避免交叉污染。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36。

保存与运输：-20℃避光保存，低温运输；避免反复冻融。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

提取效率差异影响定量准确性。

声明：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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