车前草探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于车前草（Plantago spp.）的快速、高特异性核酸鉴定，适用于科研场景下的定性或定量分析。试剂盒包含优化的引物探针组合、阳性对照及预混反应体系，灵敏度高（检测下限达10^1拷贝/μL），线性范围覆盖5个数量级，可有效区分假阴性结果。

包装规格

试剂一：探针法qPCR缓冲液（500 μL）

试剂二：探针法qPCR酶混合液（50 μL）

试剂三：荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）

试剂四：PCR引物-探针干粉（50次反应）

试剂五：PCR阳性对照（10^7拷贝/μL，50 μL）

操作流程

1. 标准曲线制备

使用阳性对照（10^7拷贝/μL）进行10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作以避免污染。

标记离心管（1–6号），依次加入稀释液并混匀，冰上保存备用。

2. 样品DNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），PC为阳性对照的1000倍稀释液。

兼容多数商业DNA提取试剂盒，需确保模板纯度。

3. qPCR反应体系（20 μL）

样品管：10 μL缓冲液 + 2 μL酶混合液 + 1 μL探针 + 2 μL引物 + 5 μL模板。

阴性对照：以超纯水替代模板。

标准曲线管：加入对应梯度稀释液5 μL。

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

5. 数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39–40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免交叉污染。

质量控制：阴性对照Ct≥40，阳性对照需有典型扩增曲线（Ct≤39）。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

局限性声明

检测结果受样本采集、保存及提取方法影响。

基因突变或试剂运输不当可能导致假阴性/假阳性。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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