赤小豆探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

探针设计：针对赤小豆基因保守区域设计特异性引物及探针，探针5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

实时定量：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶序列的定性与定量分析。

试剂盒组成

生物版本：

试剂一：qRT-PCR缓冲液（500 μL）

试剂二：酶混合液（100 μL）

试剂三：模板稀释液（1 mL）

试剂四：引物混合液（100 μL）

试剂五：探针（50 μL）

试剂六：阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50 μL）

生物版本：

赤小豆扩增液（25 μL×1管）

赤小豆反应液（975 μL×1管）

阳性质控品/阴性质控品（各50 μL）

操作步骤

标准曲线制备（6个梯度稀释，10^2~10^7拷贝/μL）。

样本处理：

提取样本RNA/DNA（推荐商品化提取试剂盒）。

阴性对照（超纯水）与阳性对照（试剂盒提供）同步处理。

反应体系配制（20-25 μL/反应）：

模板5 μL + 反应液15-19.5 μL + 酶/探针混合液2-0.5 μL。

PCR扩增程序：

逆转录（50℃ 30 min，若需）→ 预变性（94℃ 10 min）→ 40循环（94℃ 15 sec，60℃ 1 min，FAM通道采集信号）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct≥40或无扩增；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

仪器兼容性：适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光PCR仪。

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