川楝子探针法PCR鉴定试剂盒 新品

预期用途

用于检测川楝子核酸，适用于科研领域，不用于临床诊断。

检验原理

采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，通过特异性引物和探针靶向川楝子基因保守区域。扩增过程中，探针被Taq酶切割释放荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度实现定性或定量分析。

试剂组成

核心组分：

探针法qRT-PCR缓冲液

酶混合液（含逆转录酶及Taq DNA聚合酶）

荧光标记探针及引物混合液

阳性对照（无传染性DNA片段，1×10^8拷贝/μL）

阴性对照（无核酸酶水）

其他：说明书、专用模板稀释液。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融（≤7次）。

运输：低温（-20℃）冰袋运输。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI系列、Bio-Rad、LightCycler等），需配备FAM荧光通道。

样本要求

样本类型：全血、血清、粪便、拭子等，避免交叉污染。

保存：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月），运输需2~8℃冰袋。

操作步骤

标准曲线制备：

阳性对照梯度稀释（10^1~10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

核酸提取：

推荐使用商品化RNA提取试剂，纯化后模板保存于-15℃以下。

PCR反应体系配制（20μL/管）：

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

扩增程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增：40循环（94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟，采集FAM信号）。

结果分析

定量检测：以Ct值为纵轴、标准品log浓度为横轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。

可疑（35<Ct<40）：需复测，复测Ct<40判为阳性。

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作（试剂配制、样本处理、扩增），避免污染。

使用无核酸酶耗材（吸头、离心管）。

试剂完全解冻后混匀离心，避免气泡。

阳性对照单独存放，严禁用于人体。

免责声明

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或治疗。

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