穿山甲探针法PCR鉴定试剂盒 新品

技术原理

采用 TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对穿山甲基因保守区域设计特异性引物及探针。通过荧光信号实时监测扩增过程，实现高灵敏度（检测限低至10拷贝/μL）和高特异性（与相近物种无交叉反应）。

适用场景：穿山甲核酸的定性或定量检测，用于科研用途，不适用于临床诊断。

试剂盒组成

核心组分：

预混PCR反应液（含酶、dNTPs、缓冲液）

穿山甲特异性引物-探针干粉

阳性对照（人工合成DNA片段，10^7拷贝/μL）

阴性对照（无核酸酶水）

荧光PCR专用模板稀释液

自备耗材：

无DNA/RNA污染的离心管、滤芯吸头、荧光定量PCR仪（兼容ABI、Bio-Rad等主流机型）。

操作流程

1. 样本处理

样本类型：组织、血液、分泌物等，需提取DNA（推荐商品化提取试剂盒）。

保存条件：短期-20℃，长期-70℃，避免反复冻融。

2. 试剂配制

解冻后涡旋混匀，按比例配制反应体系（20μL/反应）：

反应液19.5μL + 扩增液0.5μL + 模板DNA 5μL。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| | 55-60℃ | 30 sec | |

4. 结果判读

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

灰区（Ct 35-40）：建议复测。

性能参数

灵敏度：最低检测限10-100拷贝/μL。

特异性：与常见病毒及近源物种无交叉反应。

重复性：批内/批间变异系数＜5%。

注意事项

防污染：分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），使用滤芯吸头。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

样本降解或提取效率低影响结果准确性。

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