垂盆草探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品用途

科研用途，适用于垂盆草RNA的定性及定量检测，严禁用于临床。

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

信号检测：扩增过程中荧光强度与产物量成正比，通过Ct值定量起始模板浓度。

高特异性：引物及探针针对垂盆草保守序列设计，避免交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/含量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL（1×浓度） |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶）|

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 垂盆草引物混合液 | 100μL |

| 垂盆草探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（7-2号），依次稀释阳性对照至10²~10⁷拷贝/μL，冰上保存。

2. RNA提取

建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。

兼容柱式或磁珠法RNA提取试剂盒。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板 | 5 | - | - |

| 超纯水 | - | 5 | - |

| 标准曲线稀释液 | - | - | 5（对应梯度） |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，扩增曲线明显；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

探针避光：避免反复冻融，短暂离心后使用。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及仪器。

声明：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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