椿皮探针法PCR鉴定试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光PCR技术，专用于椿皮核酸的体外定性检测，适用于科研领域对椿皮感染的辅助分析。检测结果仅供研究参考，不可用于临床诊断或治疗。

检验原理

通过设计椿皮基因保守区特异性引物及探针，在PCR扩增过程中，Taq酶切割探针释放荧光信号，实时监测荧光强度实现定性或定量分析。探针5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团，扩增时荧光信号与产物量成正比。

试剂组成

探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）

酶混合液（100μL）

荧光PCR模板稀释液（1mL）

椿皮引物混合液（100μL）

椿皮qRT-PCR探针（50μL）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50μL）

说明书（1份）

储存条件及有效期

-20℃避光保存，有效期12个月；避免反复冻融（建议分装保存）。

适用仪器

兼容ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪，需配备FAM检测通道。

自备耗材

无核酸酶离心管、滤芯吸头（10/200/1000μL）、移液器、冰盒等。

样品要求

样本类型：组织、血液、分泌物等（需避免交叉污染）。

保存：短期-20℃，长期-70℃；运输需2-8℃冰袋。

实验步骤

标准曲线制备（6个梯度稀释阳性对照，10^2-10^7拷贝/μL）。

RNA提取：推荐柱式提取法，制备阴性/阳性对照。

反应体系配制（20μL/管）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物混合液2μL + 模板RNA 5μL。

PCR扩增程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）

结果判读

定量分析：以标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct≤35且扩增曲线典型；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

不同批号组分禁止混用。

操作分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）避免污染。

阳性对照最后添加，防止气溶胶污染。

本产品仅限科研使用。

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