螺源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

螺源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术：

特异性探针：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR延伸阶段，DNA聚合酶切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

定量分析：通过Ct值（循环阈值）与标准曲线，计算样本中螺源性DNA的初始浓度（绝对定量）或相对含量。

核心优势：

高特异性：需引物和探针同时结合目标序列，显著降低假阳性风险。

高灵敏度：可检测低至10²拷贝/μL的靶标DNA。

宽动态范围：线性范围覆盖10²–10⁷拷贝/μL。

试剂盒组成

| 成分 | 包装规格 | 功能说明 |

| PCR预混液 | 500 μL（含酶、dNTPs） | 提供扩增所需基础反应体系 |

| 螺源性引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增目标序列 |

| 荧光探针 | 50 μL（避光保存） | 靶标检测与信号生成 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 验证实验体系有效性 |

| 阴性对照（超纯水） | 1 mL | 排除污染与假阳性 |

| 核酸释放剂（试用装）| 1 mL | 简化DNA提取流程（可选） |

实验操作流程

1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）

稀释步骤：

取6支离心管，分别加入45 μL专用稀释液。

首管加入5 μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得到1×10⁷拷贝/μL标准品。

依次稀释至1×10²拷贝/μL（共6个梯度）。

注意事项：

独立操作区域，避免交叉污染。

使用带滤芯枪头。

2. 样本DNA提取

推荐使用柱式DNA提取试剂盒或配套核酸释放剂，确保提取的DNA无抑制剂（如多糖、酚类）。

3. PCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 荧光探针 | 1 |

| 模板DNA | 2 |

| 超纯水 | 补足至20 |

4. 扩增程序（以ABI 7500为例）

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃, 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃, 15 s | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃, 1 min | |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

阳性：Ct≤36且曲线呈指数增长。

可疑结果（36<Ct<40）：需重复实验确认。

注意事项

防污染措施：

阳性对照与样本分区域操作，使用紫外灭菌工作台。

实验后及时清理台面，避免气溶胶污染。

试剂保存：

酶与探针需分装保存，避免反复冻融。

质量控制：

每批次实验需包含阴性对照（NTC）与阳性对照。

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