鸭星状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

鸭星状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于鸭星状病毒（Duck Astrovirus, DAstV）的核酸定性及定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏度（最低检测限100拷贝/反应）和高特异性，可有效区分假阴性样本，避免与其他微生物核酸的交叉反应。

包装规格及成分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |

注：引物-探针干粉需短暂离心后加入165 μL超纯水混匀，未用完部分需-20℃保存。

操作流程

1. 标准曲线样品制备（10^1–10^6拷贝/μL梯度稀释）

标记6管，依次编号6至1，每管加45 μL模板稀释液。

6号管加入5 μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡混匀得10^6拷贝/μL标准品，依次稀释至10^1拷贝/μL。所有操作需在独立区域进行，避免污染。

2. 样本DNA制备

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。PC为阳性对照的1000倍稀释液，NC为超纯水。

兼容市售DNA提取试剂盒，需确保样本纯度。

3. qPCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 样品管（N+2） | 阴性对照管 | 标准曲线管（2–7号） |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| qPCR酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样本DNA/标准品/水 | 5 μL | 5 μL水 | 5 μL对应标准品 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

PCR循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性检测：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39；样本Ct≤39判为阳性，≥40为阴性，39–40需复测。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

试剂使用前需混匀离心，避光保存；反应液避免气泡。

实验后需用10%次氯酸或75%酒精消毒台面及移液器。

所有废弃物按生物危害物处理。

保存与有效期

保存条件：-20℃避光

有效期：12个月

局限性

检测结果受样本质量、提取方法、运输保存条件影响。

基因突变可能导致假阴性；污染可能导致假阳性。

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