鹅星状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

鹅星状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，特异性检测鹅星状病毒（GAstV）核酸，适用于：

鹅星状病毒感染的实验室辅助诊断；

科研用途（如病毒载量定量分析、流行病学调查等）；

不适用于临床诊断或治疗（阳性对照为人工合成DNA片段，无传染性）。

检验原理

引物与探针设计：针对GAstV基因组高度保守区域设计，确保高特异性（无交叉反应）。

荧光信号释放：PCR扩增时，探针水解产生荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量/定性分析。

灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 规格 |

| 扩增反应液 | 20μL×50管 | 19.5μL/管（GAstV反应液）|

| 阳性对照 | 1×10^7拷贝/μL | 50μL（人工DNA片段） |

| 阴性对照 | 无核酸酶水 | 50μL（无核酸酶水） |

| 荧光PCR专用稀释液 | 含 | 需自备 |

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 系列（如7500、StepOnePlus）

安捷伦（MX3000P/3005P）

Roche LightCycler

Bio-Rad（CFX系列）

Eppendorf Mastercycler

样本要求

样本类型：肠道组织、全血、血清、粪便、呼吸道分泌物、拭子等。

样本处理：

短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（避免反复冻融）。

推荐使用商品化核酸提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。

操作步骤

1. 试剂准备

平衡试剂至室温，振荡混匀后离心分装。

标准曲线制备（6个梯度稀释，10^1–10^6拷贝/μL）。

2. 加样

每反应体系20μL：模板DNA 5μL + 反应液15μL（含引物、探针、酶等）。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 荧光采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 否 |

| | 55℃ | 30 sec | 40 | 是（FAM通道） |

4. 结果判读

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。

可疑：35<Ct≤38，需复测。

阴性：无Ct值或Ct≥40。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免污染。

质控要求：

阴性对照：Ct≥40或无信号。

阳性对照：Ct≤36且曲线典型。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%酒精消毒台面及器材。

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