肉毒梭状芽孢杆菌G型外毒素基因探针法荧光定量PCR试剂盒

肉毒梭状芽孢杆菌G型外毒素基因探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法，特异性检测肉毒梭状芽孢杆菌G型外毒素基因。适用于科研领域对食品、环境样本及临床标本中肉毒梭菌的定性和定量分析，不可用于临床诊断。

核心原理

探针设计：探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，特异性结合目标序列。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。

定量分析：通过标准曲线计算样本中病原体的拷贝数，线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

产品组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500μL | 含dNTPs、Mg²⁺等反应组分 |

| qPCR酶混合液 | 50–100μL | 含热启动Taq酶及逆转录酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 用于标准品稀释 |

| 引物-探针干粉/混合液 | 50T/100μL | 特异性引物及探针 |

| 阳性对照（无传染性DNA） | 50μL（10^7–10^8拷贝/μL） | 标准曲线构建及质控 |

操作流程

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（6–1号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上保存。

2. 样本DNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），使用兼容的DNA提取试剂盒。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管/标准管 | 阴性对照管 |

| qPCR缓冲液 | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL |

| 引物-探针混合液 | 2μL | 2μL |

| 模板DNA/标准品 | 5μL | — |

| 超纯水 | — | 5μL |

4. 扩增程序

逆转录：50℃ 30 min（若含RNA步骤）。

预变性：94℃ 10 min。

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤39，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

灰区（39<Ct<40）：需复测。

注意事项

防污染：分区分操作，使用带滤芯枪头，实验后消毒台面。

储存：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤10次），有效期12个月。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；交叉污染可能导致假阳性。

提取效率差异可能影响定量准确性。

技术参数

灵敏度：100–500拷贝/反应。

特异性：经生物信息学验证，无交叉反应。

重复性：CV≤5%。

公司正在出售的产品