大青叶探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，通过探针法特异性检测大青叶核酸：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶序列的定性与定量检测。

产品特点

高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10¹拷贝/μL。

高特异性：针对大青叶保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品RNA模板。

双模式检测：支持定性与定量分析（线性范围：10¹–10⁷拷贝/μL）。

内置对照：含无传染性阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）及阴性对照。

试剂盒组分

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 大青叶引物混合液 | 100μL |

| 大青叶探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

标准曲线制备

标记6管，依次稀释阳性对照（10倍梯度，10⁷–10²拷贝/μL）。

每管加入45μL稀释液及5μL上一浓度对照，涡旋混匀。

RNA提取

建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照）。

使用兼容RNA提取试剂（如柱式法或免提取释放剂）。

qRT-PCR反应

体系配置（20μL/反应）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。

程序设置：

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35或 ≤ 36，且有扩增曲线。

阴性：Ct ≥ 40。

灰区（35–40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需独立区域，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

防护措施：使用一次性耗材，实验后消毒台面（75%乙醇或10%次氯酸）。

运输要求：低温运输（泡沫箱加冰），避免反复冻融。

声明

本产品仅限科研使用，不得用于临床诊断或其他非科研用途。

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