胆南星探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

采用探针法荧光定量PCR技术，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性水解探针，释放5'端荧光报告基团（如FAM），实现实时荧光信号检测。探针3'端含淬灭基团，扩增时荧光信号与产物量成正比，通过标准曲线定量分析目标RNA/DNA。

产品特点

高特异性：引物及探针针对胆南星保守序列设计，避免交叉反应。

高灵敏度：检测限可达100拷贝/反应，适用于低丰度样本。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供模板RNA/DNA。

内控设计：含阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，排除假阴性/假阳性。

适用范围：科研用途（不适用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液（含逆转录酶） | 100μL |

| 胆南星引物混合液 | 100μL |

| 胆南星荧光探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 模板稀释液 | 1mL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度）

取6管，分别加入45μL稀释液，依次梯度稀释阳性对照（10倍稀释，冰上操作）。

2. 样本处理

RNA提取：推荐柱式法纯化，设置阴性（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。

反转录：50℃ 30分钟（若检测RNA）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量分析：以阳性对照Ct值绘制标准曲线，计算样本拷贝数。

定性判断：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤32。

注意事项

分区操作：模板制备、试剂配制、扩增需独立区域，避免污染。

耗材要求：使用无核酸酶枪头/离心管，试剂分装避免反复冻融。

质控标准：若阳/阴性对照异常，实验无效需重复。

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