党参探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与目标DNA特异性结合。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度变化，实时计算Ct值，实现对党参DNA的定性和定量检测。

产品特点

高特异性：引物及探针针对党参保守基因序列设计，避免交叉反应。

高灵敏度：可检测低至10^2拷贝/μL的模板浓度。

便捷性：预混试剂（含缓冲液、酶、引物、探针），即开即用。

质控保障：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，确保结果可靠性。

适用范围：适用于科研用途（如药材鉴定、物种溯源），不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 党参引物混合液 | 100μL |

| 党参探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样品RNA提取

推荐使用柱式RNA提取试剂盒，制备阴性（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免RNA降解。

不同批次试剂避免混用，反应体系需避光。

废弃组分按生物危害品处理。

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