灯心草探针法PCR鉴定试剂盒

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测灯心草特异性基因序列。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现靶序列的定量与定性分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对灯心草保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），可区分假阴性结果。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 荧光探针 | 50μL |

| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10^2-10^7拷贝/μL）

使用专用稀释液逐步稀释阳性对照，冰上保存备用。

2. RNA提取

推荐配套RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板/稀释标准品 | 5 | - | 5（对应梯度） |

| 超纯水 | - | 5 | - |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

PCR循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性，35<Ct<40需复测。

注意事项

操作分区进行，避免污染。

试剂保存于-20℃，避免反复冻融。

阳性对照为DNA片段，无传染性。

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