地肤子探针法PCR鉴定试剂盒

预期用途

本试剂盒基于探针法实时荧光定量PCR技术，专用于地肤子核酸的体外定性检测，适用于科研场景下的物种鉴定或感染辅助诊断。检测结果仅供研究参考，不可用于临床诊断或治疗。

检验原理

采用TaqMan探针法：

探针设计：针对地肤子基因保守区域设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。

实时检测：通过荧光定量PCR仪监测扩增过程中的荧光强度变化，实现靶序列的定性与定量分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格（50次） | 备注 |

| 反应液 | 975 μL×1管 | 含缓冲液、dNTPs、酶等 |

| 扩增液 | 25 μL×1管 | 含引物、探针 |

| 阳性质控品 | 50 μL×1管 | 人工合成DNA片段（1×10^8拷贝/μL）|

| 阴性质控品 | 50 μL×1管 | 无核酸酶水 |

| 说明书 | 1份 | |

注意：不同批号组分不可混用，避免反复冻融（≤7次）。

适用仪器

支持ABI系列、Bio-Rad CFX、LightCycler、MX3000P等荧光定量PCR仪。需自备无核酸酶耗材（离心管、吸头等）。

样本要求

样本类型：组织（如肠道）、全血、血清、粪便、拭子等。

保存与运输：短期-20℃保存，长期需-70℃；运输使用2~8℃冰袋，避免冻融。

操作步骤

核酸提取：推荐使用商品化DNA提取试剂盒，提取后模板保存于-15℃以下。

试剂配制：

解冻后混匀试剂，按N（样本数+阳/阴性对照）计算反应体系（如20 μL/管：19.5 μL反应液+0.5 μL扩增液）。

分装至PCR管，加入5 μL模板（样本/对照）。

PCR扩增：

程序设置：

预变性：95℃ 3分钟；

40循环：95℃ 15秒 → 55℃ 30秒（FAM通道采集信号）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型；

可疑：35<Ct<40，需复测；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

阳性对照需最后加样，防止气溶胶污染。

本产品仅限科研使用，严禁临床应用。

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