地黄探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶基因的定量或定性检测。

产品组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 地黄探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |

| 试剂五 | 地黄qRT-PCR探针 | 50μL |

| 试剂六 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 其他 | 说明书 | 1份 |

产品特点

高特异性：引物及探针针对地黄保守基因序列设计，避免交叉反应。

高灵敏度：最低检测限可达10²拷贝/μL。

即开即用：用户仅需提供样品RNA模板。

内控设计：含阳性对照，可区分假阴性结果。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10²~10⁷拷贝/μL）：

使用阳性对照按10倍梯度稀释，避免交叉污染。

2. 样品RNA提取：

推荐使用柱式RNA提取试剂盒，或兼容的其他方法。

3. qPCR反应体系（20μL）：

| 成分 | 体积（μL） |

| 探针法缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 地黄探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 样品RNA/标准品/阴性对照 | 5 |

4. 反应程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

防污染措施：分区操作（样品制备区、扩增区），使用带滤芯枪头。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照。

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