结肠弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

结肠弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于结肠弯曲杆菌（Campylobacter coli）核酸的快速、高灵敏度检测。通过特异性引物和探针设计，结合实时荧光信号采集，实现对目标基因的定性和定量分析，适用于食品安全监测、环境样本筛查及科研领域。

检测原理

探针法原理：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶切割与靶序列结合的探针，释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

实时定量：通过监测每个循环的荧光强度变化，生成扩增曲线和Ct值，计算初始模板浓度。

产品特点

高特异性：引物探针经生物信息学验证，与空肠弯曲杆菌等近源菌无交叉反应（特异性≥99%）。

高灵敏度：最低检测限达10³–10⁵ copies/mL（部分优化体系可达100–500 copies/mL）。

快速高效：全程检测时间1.5–2小时（含核酸提取），显著优于传统培养法（24–48小时）。

操作便捷：预混反应体系，兼容自动化提取设备，支持批量检测。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 功能说明 |

| 荧光PCR反应液（含缓冲液） | 500–950 μL | 提供dNTPs及反应缓冲环境 |

| 引物/探针混合物 | 100–200 μL | 靶向结肠弯曲杆菌保守基因区域 |

| 酶混合物（含DNA聚合酶） | 48–50 μL | 催化扩增反应 |

| 阳性质控品（人工DNA片段）| 50 μL（1×10⁸ copies/μL） | 验证实验有效性 |

| 阴性质控品（无菌水） | 50 μL | 监控污染及假阳性 |

| 使用说明书 | 1份 | 操作流程及质控标准 |

样本要求

适用样本类型：粪便、食品（肉类、乳制品）、环境拭子、临床样本（需符合生物安全规范）。

核酸提取建议：

推荐使用磁珠法或离心柱法提取DNA，确保纯度。

粗提法：100℃加热裂解10分钟后离心取上清。

操作步骤

标准曲线制备（梯度稀释阳性质控品至10²–10⁷ copies/μL）。

反应体系配置（20 μL体系）：

荧光PCR反应液：10 μL

酶混合物：2 μL

引物/探针混合液：2 μL

模板DNA：5 μL

扩增程序：

预变性：95℃ 10分钟

循环扩增（40–45循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）。

结果判读

定性分析：

阳性：Ct值≤38且扩增曲线呈S型。

阴性：无Ct值或Ct值>40。

定量分析：通过标准曲线计算样本初始拷贝数。

注意事项

生物安全：

仅限科研或兽医诊断使用，不可用于临床。

操作需在BSL-2实验室进行。

防污染措施：

严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

使用带滤芯枪头，避免交叉污染。

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

免责声明

本产品仅用于科学研究，不适用于临床诊断或治疗。用户需确保操作符合当地法规及实验室安全标准。

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