海鸥弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

海鸥弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专用于海鸥弯曲杆菌（Campylobacter laridis）的快速、精准检测，采用探针法荧光定量PCR技术（TaqMan探针），通过特异性引物和荧光标记探针靶向病原体保守基因序列（如16S rRNA或毒力基因），实现高灵敏度、高特异性的定性和定量检测。适用于临床诊断、食品安全及环境监测等领域。

技术参数

检测原理：基于TaqMan探针技术，实时监测扩增过程中释放的荧光信号（FAM通道），通过Ct值定量目标DNA。

灵敏度：100–500拷贝/反应。

线性范围：10²–10⁷拷贝/μL（覆盖5个数量级）。

特异性：与空肠弯曲杆菌等近缘种无交叉反应。

防污染设计：闭管操作，含阴性对照及专用稀释液。

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 功能说明 |

| 2×qPCR预混液 | 500 μL | 含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液 |

| 引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增目标基因 |

| TaqMan探针 | 50 μL | FAM标记，靶向保守序列 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）| 50 μL | 重组质粒DNA，用于标准曲线 |

| 阴性对照 | 50 μL | 无菌水，监控污染 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 样本及对照梯度稀释 |

操作流程

1. 样本制备

提取样本DNA（推荐商品化提取试剂盒），浓度建议≤100 ng/μL。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释至10²–10⁷拷贝/μL（需独立操作区，避免污染）。

2. PCR反应体系（20 μL）

2×qPCR预混液：10 μL

引物混合液：2 μL

探针：1 μL

模板DNA：2 μL

无菌水：补至20 μL

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环次数 |

| 预变性 | 95℃ 5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ 15 sec → 60℃ 45 sec（采集荧光） | 40 |

4. 适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/7900、StepOnePlus

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler

结果判读

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

灰区样本：Ct值35–40需复检。

定量分析：以阳性对照标准曲线计算样本载量。

质控要求

阳性对照：Ct值≤30。

阴性对照：无扩增信号（Ct值≥40）。

注意事项

防污染措施：

严格分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区）。

使用带滤芯枪头，避免交叉污染。

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

生物安全：样本处理需在生物安全柜中进行，废弃物高压灭菌。

应用场景

临床诊断：腹泻病原体快速筛查。

食品安全：畜禽产品（鸡肉、猪肉）污染监测。

环境监测：水源或养殖场病原体检测。

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