牛附红细胞体（牛嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

牛附红细胞体（牛嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

实验原理

基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和探针靶向牛附红细胞体（Eperythrozoon wenyoni）保守序列，实现高灵敏度（可达几百拷贝/反应）和特异性检测，避免交叉污染。

试剂盒组成

反应液A-TSV-I：含PCR缓冲液、dNTPs、Mg²⁺等。

酶混合液（B-I+R-I）：含热启动DNA聚合酶、逆转录酶（若需）。

阳性对照：1×10⁸拷贝/μL牛嗜血支原体DNA。

阴性对照：无核酸酶水。

操作步骤

1. 样本制备

使用配套DNA提取试剂盒或自选方法提取样本DNA，建议设置N+2个样本（含阴性/阳性对照）。

阳性对照（PC）：取10μL 1×10⁵拷贝/μL稀释液；阴性对照（NC）：使用无核酸酶水。

2. 标准曲线制备（定量检测需选）

将阳性对照梯度稀释（10⁷至10²拷贝/μL），每个浓度分装后冰上保存。

3. PCR反应体系配制（20μL/管）

| 成分 | 体积（μL） |

| 反应液A-TSV-I | 17.0 |

| 酶混合液（B-I+R-I） | 1.0 |

| 模板DNA | 2.0 |

4. 扩增程序

恒温荧光仪：63℃反应60分钟。

荧光定量PCR仪：

预变性：95℃ 3分钟；

循环：95℃ 15秒 → 63℃ 45秒（收集FAM荧光），共60循环。

结果判读

定量分析：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤36，典型S型扩增曲线；

阴性：Ct值≥40或无扩增；

可疑（36<Ct<40）：需复测。

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

避免污染：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

质量控制：阴性对照Ct值应≥40，阳性对照Ct值≤36。

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